Development, characterization and clinical validation of new sensitive immunofluorometric assay for the measurement of serum thyroglobulin / Desenvolvimento, caracterização e validação clínica de um novo ensaio sensível para a dosagem da tiroglobulina sérica

OBJECTIVE: In the last decade, data published stressed the role of highly-sensitive thyroglobulin (Tg) assays in the follow-up of differentiated thyroid carcinoma (DTC) patients. The present study describes a new, highly-sensitive Tg assay, compares it with an available commercial assay, and validates it in the follow-up of DTC patients. SUBJECTS AND METHODS: The immunofluorometric high-sensitivity Tg assay is based on monoclonal and polyclonal antibodies produced at our laboratories. It was validated in 100 samples of 87 patients with DTC submitted to total thyroidectomy, 87% of whom also received radioiodine. For correlation, all samples were also tested using a commercial Tg assay (Beckman Access) with functional sensitivity (FS) of 0.1 ng/mL. RESULTS: The new method showed FS of 0.3 ng/mL. The correlation between the two methods was good (r = 0.74; p < 0.0001). The diagnostic sensitivity was 88.9%, and it was increased to 100% when combined with neck US. CONCLUSION: This new, high-sensitivity Tg assay presented a good correlation with Beckman Access assay and with the clinical outcome of the patients. The continuous availability of a validated assay is an additional advantage for long term follow-up of DTC patients. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(9):658-65.

OBJETIVO: Na última década, estudos mostraram a importância dos ensaios de tiroglobulina (Tg) com melhor sensibilidade funcional no seguimento dos pacientes com carcinoma diferenciado de tiroide (CDT). Neste estudo, descrevemos o desenvolvimento de um novo ensaio de Tg de alta sensibilidade, que foi validado no seguimento de pacientes com CDT e correlacionado com um ensaio comercialmente disponível. SUJEITOS E MÉTODOS: O ensaio imunofluorométrico de Tg baseia-se em anticorpos, um monoclonal e um policlonal desenvolvidos em nosso laboratório. Avaliamos 100 amostras de soro de 87 pacientes com CDT submetidos à tiroidectomia total, sendo que 87% deles também receberam 131I. A Tg foi dosada também em ensaio comercial (Beckman Access). RESULTADOS: A correlação entre os dois métodos foi de 0,74 (p < 0,0001). O novo ensaio mostrou uma sensibilidade funcional de 0,3 ng/mL. A sensibilidade diagnóstica foi de 88,9%, que aumentou para 100% quando associada ao ultrassom cervical (US). CONCLUSÃO: O novo método de dosagem de Tg mostra boa correlação com o ensaio comercial Beckman Access e com a evolução clínica dos pacientes. O novo ensaio será fundamental no seguimento dos nossos pacientes com CDT. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(9):658-65.

Importância da metodologia na dosagem de testosterona sérica: comparação entre um imunoensaio direto e um método fundamentado em cromatografia líquida de alta performance e espectrometria de massa em tandem (HPLC/MS-MS) / The importance of methodology in serum testosterone measurement: comparison between a direct immunoassay and a method based on high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry (HPLC/MS-MS)

A dosagem de testosterona sérica, total ou fração livre, é metodologia de alto valor diagnóstico e encontra-se disponível na maioria dos laboratórios clínicos. Esta disponibilidade foi possível pelo desenvolvimento de metodologias simples e diretas, adaptáveis a plataformas de dosagem automatizada. Uma série de publicações recentes tem alertado quanto às limitações destas metodologias, em especial em amostras com baixas concentrações, como mulheres e crianças. Neste trabalho serão apresentados os resultados do emprego de uma metodologia de referência, fundamentada em cromatografia líquida de alta performance e espectrometria de massa em tandem (HPLC/MS-MS), e sua comparação com uma dosagem de rotina (ensaio eletroquimioluminescente - ECLIA). Os métodos são comparados tanto na dosagem de testosterona total (n = 213) quanto na determinação de testosterona livre calculada com base na determinação da testosterona total e da proteína carregadora de hormônios sexuais (SHBG) (n = 135). Os valores obtidos com o ECLIA são significativamente mais elevados, sendo a dispersão mais nítida em soros com baixas concentrações. Tal fenômeno fica mais claro quando apresentado na forma de gráficos de Bland-Altman. Neste trabalho são discutidas as dificuldades de implementação de uma metodologia de referência, como a apresentada, e a convivência com as metodologias de rotina, bem como a literatura recente sobre o assunto.

Serum testosterone in its total or free form, is a highly valuable diagnostic test and is available in the great majority of clinical laboratories. This reality was possible due to the development of simple and direct assays, adaptable to large automatic systems. Recent publications have called attention to the limitations of these simplified methodologies, mainly in samples with low concentration, as women and children. In this paper we present results obtained using a reference method based on high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry (HPLC/MS-MS) and its comparison with those obtained with a commercial routine immunoassay (electrochemiluminescent assay, ECLIA). Methods were compared in total testosterone measurement (n = 213), as well as in free testosterone evaluation based on calculation inclu-ding sex hormone-binding protein (SHBG) levels (n = 135). Values obtained with ECLIA were significantly higher, with more marked dispersion in low concentration. This phenomenon is clearer when presented as a Bland-Altman plot. Difficulties in the implementation of reference methods as the one presented are discussed, as well as the necessity of caution in the interpretation of values obtained with routine assays, a matter of several publications in recent literature.

Definição de valores normais de tiroxina livre durante a gravidez / Free thyroxine values during pregnancy

A gravidez é acompanhada por uma série de modificações fisiológicas que incluem uma elevação significativa da globulina ligadora de tiroxina (Thyroxine-Binding Globulin, TBG). Tal elevação interfere nos níveis séricos totais da tiroxina (T4) e corrobora a utilização da medida de tiroxina livre (T4L), em conjunto com a dosagem de TSH, como métodos de primeira linha para a avaliação de função tiroidiana na gravidez. Uma definição cuidadosa dos valores normais de T4L durante a gestação é fundamental para o estudo de alterações da função tiroidiana, desde que disfunções mínimas podem resultar em anormalidades fetais significativas. Estudamos 132 grávidas normais, entre 6 e 38 semanas de gestação, e os resultados da medida de T4L por método indireto em duas etapas (valores normais de 0,7 a 1,5ng/dL em não grávidas, n= 797) mostraram valores entre 0,5 e 1,3ng/dL, com média±DP de 0,78±0,16ng/dL, significativamente mais baixos que os observados em não grávidas (0,98±0,14ng/dL, P<0,0001). Estes valores tendem a cair progressivamente ao longo da gestação, observando-se uma correlação negativa significativa com os níveis de TBG (rs= -0,51, P<0,0001), e com a idade gestacional (rs= -0,649, P<0,0001). Os níveis de TSH não mostraram correlação com a idade gestacional. Nossos dados comprovam a necessidade de definição mais rigorosa dos valores normais para T4L em mulheres grávidas, objetivando uma avaliação laboratorial mais precisa no diagnóstico e acompanhamento de disfunções tiroidianas nesse grupo de pacientes.

Desenvolvimento de ensaio imunofluorométrico para a medida da globulina ligadora de tiroxina (thyroxine-binding globulin, TBG) e sua aplicaçäo em casos de deficiência desta proteína / Development of an immunofluorometric assay for thyroxine-binding globulin (TBG) and its application in cases of protein deficiency

A globulina ligadora de tiroxina (thyroxine-binding globulin, TBG) é a principal transportadora de hormônios tiroidianos no soro. Variaçöes na concentraçäo sérica de TBG determinam variaçöes proporcionais nas concentraçöes séricas totais de T4 e T3, sem implicar alteraçöes de funçäo, desde que a fraçäo livre permaneça normal. Várias condiçöes clínicas comuns levam a alteraçöes significativas nos níveis de TBG, sendo as variaçöes mais importantes devidas a defeitos genéticos. Como a TBG é codificada por gene localizado no cromossomo X, os defeitos se manifestam mais facilmente no sexo masculino. Descrevemos o desenvolvimento de ensaio imunofluorométrico para a medida de TBG com base em anticorpos monoclonais, sendo um desenvolvido em nosso laboratório e outro comercial. O método apresenta sensibilidade de 0,8mg/l e coeficientes de variaçäo intra e interensaio inferiores a 10 por cento. O estudo comparativo com método comercial mostrou alta correlaçäo (r = 0,93; n = 48), sendo os valores normais obtidos de 10mg/l a 29mg/l. Estudamos também 20 indivíduos portadores de deficiência congênita de TBG, 19 homens e uma mulher, que apresentavam valores normais de TSH e baixos de T4 total; em todos eles os níveis de TBG foram indetectáveis. Já os níveis de T4 livre medidos por método indireto em 16 desses indivíduos mostraram-se elevados em todos, ao passo que, quando medidos por método direto pós-diálise nos quatro restantes, mostraram-se normais. Nossos resultados reforçam a necessidade prática da disponibilidade de ensaio para a medida de TBG para esclarecimento e definiçäo diagnóstica de alguns casos especiais, principalmente quando o ensaio de T4 livre direto, pós-diálise, näo é disponível